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ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB 7300.901—2019 代替GB/T19370—2003 饲料添加剂 第9部分:着色剂 β-胡萝下素粉 Feed additives-Part 9 :Coloring agentsβ-Carotene powder 2020-07-01实施 2019-12-17发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB7300.901—2019 前言 本部分的第1章、第4章、第6章和第7章为强制性的,其余为推荐性的 GB7300《饲料添加剂》按产品分为若干部分。 本部分为GB7300的第901部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分代替GB/T19370—2003《饲料添加剂1%β-胡萝卜素》,与GB/T19370—2003相比,除编 辑性修改外主要技术变化如下: 修改了标准的适用范围(见第1章,2003年版的第1章); 修改了β-胡萝卜素含量要求(见4.4,2003年版的3.2); 删除了灼烧残渣指标(见4.4,2003年版的3.2); 删除了铅指标,增加了“重金属”指标(见4.4,2003年版的3.2); -增加了粒度的规定(见4.4,2003年版的3.2); 修改了鉴别方法(见6.2,2003年版的4.3); 修改了紫外-可见分光光度法(见6.3.1;2003年版的4.4); 一增加了高效液相色谱法(见6.3.2); 修改了总的测定方法(见6.6,2003年版的4.6)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任, 本部分由中华人民共和国农业农村部提出并归口。 本部分起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 (北京)、浙江省兽药饲料监察所、广州立达尔生物科技股份有限公司 本部分主要起草人:赵小阳、虞哲高、陶正国、杨金枢、吴秀丽、陈小兵、梅娜、盛翠风、施东明、陈冰、 李丽蓓、黄娟。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为: GB/T19370—2003。 GB7300.901—2019 饲料添加剂第9部分:着色剂 β-胡萝卜素粉 1范围 GB7300的本部分规定了饲料添加剂β-胡萝卜素粉的技术要求、取样、试验方法、检验规则、标签、 包装、运输、贮存和保质期。 本部分适用于以化学合成的β-胡萝卜素晶体为原料,添加淀粉、明胶等辅料经喷雾、包被、干燥制成 的饲料添加剂β-胡萝卜素粉。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法 GB/T6435—2014饲料中水分的测定 GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB 8821- -2011 食品安全国家标准食品添加剂β-胡萝卜素 GB 10648 饲料标签 GB/T13079—2006饲料中总砷的测定 GB/T14699.1饲料采样 Z1 GB/T20195动物饲料试样的制备 3 3化学名称、分子式、相对分子质量和结构式 化学名称:1,1-3,7,12,16-四甲基)-(1,35,7,9,11,13,15,17-十八碳王烯-118-二基)双(2,6,6 三甲基环已烯) 分子式:C4oHs6 相对分子质量:536.88(按2016年国际相对原子质量) 结构式: 4技术要求 4.1原料要求 以化学合成β-胡萝卜素为原料,含量规格为96.0%~101.0%。 1 GB7300.901—2019 4.2 外观与性状 本品为色泽均匀一致的微粒,易吸潮,遇热、酸、光或吸潮后易分解。 4.3 3鉴别 应符合β-胡萝卜素的紫外-可见光吸光度要求,或液相色谱图的特征。 4.4理化指标 理化指标应符合表1的规定。 表1理化指标 项目 指标 β-胡萝卜素含量(以C4oH56计,占标示量的百分比)/% 96 干燥失重/% 10.0 通过孔径为0.84mm(20目)筛网 95 粒度/% 通过孔径为0.15mm(100目)筛网,筛下物 < 15 总砷/(mg/kg) 2.0 重金属(以Pb计)/(mg/kg) 10 5取样 按照GB/T14699.1的规定执行。 6 试验方法 6.1 感官检验 取适量样品置于清洁干燥的白瓷盘中,在自然光线下观察其色泽。 6.2 鉴别试验 鉴别1:将6.3.1.5得到的5mL待测溶液,加人5mL环已烷混勾,置于1cm比色皿中,以环已烷为 空白,在波长455nm和483nm处测定吸光度A455和A483。A455/A483的比值应在1.10~1.30。 鉴别2:按照色谱条件向色谱柱中注人全反式β-胡萝卜素标准工作溶液(6.3.2.2.12)和6.3.2.4得到 的待测溶液B,试样溶液中主峰的保留时间与标准溶液中全反式β-胡萝卜素色谱峰的保留时间一致。 标准工作溶液的色谱图参见附录A中图A.1。 6.3β-胡萝卜素含量的测定 6.3.1紫外-可见分光光度法 6.3.1.1原理 酶解破膜后,用无水乙醇和二氯甲烷提取β-胡萝卜素,用环已烷稀释至适当浓度后,用紫外-可见分 光光度仪在波长421.0nm处测定试样溶液的吸光度。因试样中β-胡萝卜素的顺、反异构体在该波长处 2 GB7300.901—2019 有相同的百分吸光系数,根据该百分吸光系数计算试样中β-胡萝下素的总量。 6.3.1.2试剂或材料 本部分所用的试剂,除特殊说明外,均指分析纯试剂。 6.3.1.2.1水:符合GB/T6682中规定的二级水。 6.3.1.2.2 无水乙醇。 6.3.1.2.3 二氯甲烷。 6.3.1.2.4 环已烷。 6.3.1.2.5 26-二叔丁基对甲酚(BHT)。 6.3.1.2.6 碱性蛋白酶:酶活力>40000单位/g。 6.3.1.3 仪器设备 6.3.1.3.1 分析天平:感量为0.0001g、0.00001g。 6.3.1.3.2 超声波振荡提取器。 6.3.1.3.3 离心机。 6.3.1.3.4 紫外-可见分光光度计:波长在421nm处精度为土0.3nm(或临用前校准)。 6.3.1.4样品 按照GB/T20195规定执行。 6.3.1.5 5试验步骤 平行做两份试验,称取样品适量(相当于10mgβ-胡萝卜素),置于250mL棕色容量瓶中。在容量 瓶中加人100mgBHT,200mg碱性蛋白酶,10mL水,于50℃水浴中超声提取30min。加入100mL 摇匀,取适量于4000r/min离心5min。准确吸取上清液10mL,置于100mL棕色容量瓶中,加入 10mL无水乙醇,用环已烷溶解并稀释至刻度,摇勾后即为待测溶液。 6.3.1.6定量测定 用紫外-可见分光光度仪以环已烷为空白,1cm比色皿测定试样溶液(6.3.1.5)在工作波长421nm 处的吸光度。 6.3.1.7试验数据处理 β-胡萝卜素(C4H56)含量Wi以质量分数(%)表示,按式(1)计算: AX2500 =1m (1) 1480m 式中: A 试样溶液吸光度; 2 500 稀释体积,单位为毫升(mL); 1480 β-胡萝卜素在波长421nm处的百分吸光系数; m 试样质量,单位为克(g)。 试样中β-胡萝卜素含量占标示量的百分比W2(%),按式(2)计算: X100 (2) 3 GB7300.901—2019 式中: W1—β-胡萝卜素含量; K一产品中β-胡萝卜素标示量。 结果用算术平均值表示,保留三位有效数字。 6.3.1.8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值,不大于这两个测定值算术 平均值的3%。 6.3.2高效液相色谱法(仲裁法) 6.3.2.1原理 酶解法破膜后,用无水乙醇和二氯甲烷提取β-胡萝卜素,经稀释至适当浓度后注人液相色谱柱,顺、 反异构体经色谱柱分离,于波长445nm处检测,以外标法计算定量,并计算试样中β-胡萝下素的总量。 6.3.2.2试剂或材料 GB/T603的规定。 6.3.2.2.1水:符合GB/T6682中一级用水规定。 6.3.2.2.2 甲醇:色谱纯。 6.3.2.2.3 乙腈:色谱纯。 6.3.2.2.4 异丙醇:色谱纯。 6.3.2.2.5 N-乙基二异丙胺。 6.3.2.2.6 四氢呋喃:色谱纯。 6.3.2.2.7 乙酸铵:优级纯。 6.3.2.2.8 2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)。 6.3.2.2.9 0.2%乙酸铵溶液:称取0.2g乙酸铵,溶于100mL的水中。 6.3.2.2.10 稀释液:甲醇和乙睛按体积比为1:1的比例混合。 6.3.2.2.11全反式β-胡萝卜素标准贮备溶液:取6mg的全反式β-胡萝卜素对照品(含量≥96.0%)于 100mL的棕色容量瓶中,加人0.5gBHT,用四氢呋喃溶解并稀释至刻度,摇匀。冰箱中密闭冷冻 保存。 6.3.2.2.12标准工作溶液的制备及质量浓度的标定: 制备:准确吸取全反式β-胡萝下素标准贮备溶液(6.3.2.2.11)5mL,置于100mL棕色容量瓶中,用 稀释液(6.3.2.2.10)定容,摇匀后作为HPLC测定的标准工作溶液。 标定:准确吸取全反式β-胡萝下素标准贮备溶液(6.3.2.2.11)5mL,置于100mL棕色容量瓶中,加 入5mL无水乙醇,用环已烷溶解并稀释至刻度,摇匀。以环已烷为空白,用1cm的比色皿测定溶液在 455nm处的最大吸光度 标准溶液的质量浓度按式(3)计算: AmaxX10000 = psd ..(3) 2.500 式中: 全反式β-胡萝卜素标准工作溶液质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); Pstd Amax 全反式β-胡萝卜素在455nm波长处的最大吸光度; 4 GB7300.901—2019 10000- 单位转换系数; 2 500 全反式β-胡萝卜素在455nm波长处的百分吸光系数。 6.3.2.2.13 0.45μm微孔滤膜。 6.3.2.3 仪器设备 6.3.2.3.1 分析天平:感量为0.0001g、0.00001g。 6.3.2.3.2 超声波振荡提取器。 6.3.2.3.3 离心机。 6.3.2.3.4高效液相色谱仪,配有紫外吸收检测器(或二极管矩阵检测器)。 6.3.2.4试验步骤 按6.3.1.5中“平行做两份试验,称取样品适量(相当于10mgβ-胡萝卜素),...于4000r/min离 心5min”,准确吸取上清液5mL,置于50mL棕色容量瓶中,用稀释液(6.3.2.

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