(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110763992.3 (22)申请日 2021.07.0 6 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113476588 A (43)申请公布日 2021.10.08 (73)专利权人 武汉大学 地址 430072 湖北省武汉市武昌区八一路 299号 (72)发明人 项瑾　王昕　戚苗苗　王淏宇　 (74)专利代理 机构 北京金智普华知识产权代理 有限公司 1 1401 专利代理师 张晓博 (51)Int.Cl. A61K 38/10(2006.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/64(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 111544598 A,2020.08.18 TW 201742872 A,2017.12.16 CN 111544598 A,2020.08.18 CN 110237047 A,2019.09.17 CN 110237263 A,2019.09.17 CN 104013 599 A,2014.09.0 3 CN 10421 1815 A,2014.12.17CN 111328346 A,2020.0 6.23 CN 104017089 A,2014.09.0 3 CN 112426534 A,2021.0 3.02 赵维维.双功能碳 点标记的H -链铁蛋白靶向 诊疗体系的研究. 《中国优秀博硕士学位 论文全 文数据库(硕士) 医药卫 生科技辑》 .2019,(第01 期),第E072-126页. 赵维维.双功能碳 点标记的H -链铁蛋白靶向 诊疗体系的研究. 《中国优秀博硕士学位 论文全 文数据库(硕士) 医药卫 生科技辑》 .2019,(第01 期),第E072-126页. Fatemeh Nasro llahi等.Incorporati on of Graphene Quantum Dots, Iro n, and Doxorubici n in/on Ferritin Nanocages for Bimodal Ima ging and Drug Del ivery. 《 Adv. Therap.》 .2020,第3卷(第3期),第1-12页. Hanchun Yao等.Dual-functi onal carbo n dot-labeled heavy- chain ferritin for self-targeti ng bio-imaging and c hemo- photodynamic therapy. 《Journal of Materials C hemistry B》 .2018,第6卷(第19 期),第3107- 3115页. (续) 审查员 戴露丹 (54)发明名称 靶向乳腺癌的多功能纳米颗粒、 其制备方法 及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种靶向乳腺癌 的多功能纳米 颗粒、 其制备方法及其应用。 该多功能纳米颗粒 包括靶向载体及负载在所述靶向载体上的药物， 所述靶向载体由重组铁蛋白制成。 通过细胞实验 验证了该多功能纳米颗粒不仅对于癌细胞具有 优于常规铁蛋白作为载体的药效及药物释放能力。 该载药系统还通过装 载量子点可实现肿瘤细 胞的光学成像， 以在癌症诊断和治疗中发挥作 用。 [转续页] 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图7页 CN 113476588 B 2022.11.22 CN 113476588 B (56)对比文件 Yao H 等.Multifuncti onal ferritin nanocages for bimodal ima ging and targeted del ivery of doxorubici n into cancer cel ls. 《RSC advances》 .2016,第6卷(第 111期),第10932 2-109333页.2/2 页 2[接上页] CN 113476588 B1.一种靶向乳腺癌Wnt  /β‑catenin信号的多功能纳米颗粒， 其特征在于， 包括靶向载 体及负载在所述靶向载体上 的药物， 所述靶向载体由重组铁蛋白制成； 所述药物包括量子 点和阿霉素； 所述重组铁蛋白具有 由氮端至碳端依次连接的MMP酶切位点、 治疗多肽、 MMP酶切位点 和铁蛋白形成的一级结构； 编码所述铁蛋白的核苷酸序列如Sequence  ID: NM_002032.3所 示； 其中， 所述MMP酶切位点的氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 编码所述治疗多肽的核苷 酸序列为SEQ  ID NO.2所示， 所述治疗多肽为Wnt  /β‑catenin信号抑制剂， 可阻止β ‑ catenin与人乳腺癌细胞核区的LEF ‑1结合， 促进癌细胞凋亡， 并降低癌细胞生长和运动能 力。 2.权利要求1所述的多功能纳米颗粒的制备方法， 其特征在于， 包括制备重组铁蛋白及 装载所述药物的步骤； 其中， 所述重组铁蛋白的制备步骤 包括： 构建表达所述重组铁蛋白的基因工程菌株； 将所述基因工程菌株经平板 培养和液体诱 导培养， 得到含有所述重组铁蛋白的菌液； 收集所述菌液中的菌体， 破碎， 纯化， 得到所述重组铁蛋白。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述基因工程菌株的构建过程包括： 构建表达载体pET28a ‑HFn‑CP1， 将表达载体转化入E.coli  Rosetta(DE3)感受态细胞， 在 kana+平板上划线培 养， 挑取阳性单克隆菌落， 即为所述基因工程菌株； 其中， 所述表达载体包括分别表达MMP酶切位点、 治疗多肽及铁蛋白的核苷酸序列； 表 达所述MMP酶切位点的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 表达所述治疗多肽的核苷 酸序列如 SEQ ID NO.2所示。 4.根据权利要求3所述的制备 方法， 其特 征在于， 装载 所述药物的步骤 包括： 将量子点和阿霉素溶液添加至重组铁蛋白的尿素溶液混合， 在黑暗中孵育后， 并于尿 素缓冲液中透析处 理， 得到浓 缩物； 对所述浓 缩物进行蔗糖密度梯度离心后， 得到最终纯化的多功能纳米颗粒。 5.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述蔗糖溶液的浓度梯度依次为10   w/w%、 15 w/w%、 20 w/w%、 25 w/w%、 30 w/w%、 35 w/w%、 40 w/w%、 45 w/w%和50%。 6.权利要求1所述的多功能纳米颗粒、 或权利要求2 ‑5任一项所述的制备方法制得的多 功能纳米颗粒在制备抗乳腺癌药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113476588 B 3