(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110761493.0 (22)申请日 2021.07.0 6 (66)本国优先权数据 PCT/CN2021/085179 2021.04.02 CN (71)申请人 苏州博腾生物制药有限公司 地址 215125 江苏省苏州市苏州工业园区 新平街38 8号腾飞创新园3号楼 (72)发明人 孔令洁　陈功　J·王　郭天玮　 朱世诚　 (74)专利代理 机构 北京市君 合律师事务所 11517 专利代理师 顾云峰　张怡 (51)Int.Cl. C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01)C07K 19/00(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 靶向白蛋白的嵌合 抗原受体及其使用方法 (57)摘要 本公开提供了一种对白蛋白具有特异性的 嵌合抗原受体(CAR)。 本公开还 提供了包含CAR的 组合物、 编码CAR的多核苷酸、 包含编码CAR的多 核苷酸的载体、 包含CAR的工程细胞及其使用方 法。 权利要求书4页 说明书24页 序列表38页 附图2页 CN 115181751 A 2022.10.14 CN 115181751 A 1.一种编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸， 其中所述CAR包含(1)包含第一抗原结合 域的胞外域， (2)跨膜域和(3)胞内信号传导域， 其中所述第一抗原结合域与白蛋白特异性 结合。 2.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中所述第一 抗原结合 域是单链可变片段(scFv)。 3.根据权利要求2所述的多核苷酸， 其中所述scFv包含重链可变(VH)区和轻链可变 (VL)区。 4.根据权利要求3所述的多核苷酸， 其中所述VH区包含HCDR1， 其具有如表1所示的序 列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列； HCDR2， 其具有如表2所示的序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个 氨基酸残基差异的序列； 以及HCDR3， 其具有如表3所示的序列， 或与其具有至少90％同一性 的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列。 5.根据权利要求3所述的多核苷酸， 其中所述VL区包含LCDR1， 其具有如表4所示的序 列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列； LCDR2， 其具有如表5所示的序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个 氨基酸残基差异的序列； 以及LCDR3， 其具有如表6所示的序列， 或与其具有至少90％同一性 的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列。 6.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中所述 抗原结合 域是单域抗体(SDAB)。 7.根据权利要求6所述的多核苷酸， 其中所述SDAB包含CDR1， 其具有如表9所示的序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列； CDR2， 其 具有如表10所示的序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残 基差异的序列； 以及CDR3， 其具有如表11所示的序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列。 8.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中所述 抗原结合 域是纳米抗体。 9.根据权利 要求8所述的多核苷酸， 其中所述纳米抗体包含CDR1， 其具有如表13所示的 序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列； CDR2， 其具有如表14所示的序列， 或与其具有至少90％同一性的序列， 或与其具有1、 2、 3个 氨基酸残基差异的序列； 以及CDR3， 其具有如表15所示的序列， 或与其具有至少90％同一性 的序列， 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列。 10.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述抗原结合域包含SEQ  ID NO:131的序列 或与其具有至少90％同一 性的序列。 11.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中所述CAR还 包含信号肽。 12.根据权利要求1 1所述的多 核苷酸， 其中所述信号肽包 含CD8α 的信号肽。 13.根据权利要求12所述的多核苷酸， 其 中所述CD8α 的信号肽包含SEQ  ID NO:130的序 列或与其具有至少90％同一 性的序列； 或与其具有1、 2、 3个氨基酸残基差异的序列。 14.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中所述 跨膜域包 含CD8α 的跨膜域。 15.根据权利要求14所述的多核苷酸， 其 中所述CD8α 的跨膜域包含SEQ  ID NO:132的序 列或与其具有至少90％同一 性的序列； 或与其具有1、 2、 3、 4或5个氨基酸残基差异的序列。 16.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中所述胞外域 通过铰链区连接 至所述跨膜域。 17.根据权利要求16所述的多 核苷酸， 其中所述铰链区包 含CD8α 的铰链区。权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 115181751 A 218.根据权利要求17所述的多核苷酸， 其 中所述CD8α 的铰链区包含SEQ  ID NO:133的序 列或与其具有至少90％同一 性的序列； 或与其具有1、 2、 3、 4或5个氨基酸残基差异的序列。 19.根据权利要求1所述的多 核苷酸， 其中胞内域包 含共刺激域和信号传导 域。 20.根据权利要求19所述的多 核苷酸， 其中所述共刺激域包 含CD137的胞内域。 21.根据权利要求20所述的多核苷酸， 其中所述CD137的胞内域包含SEQ  ID NO:134的 序列或与其具有至少90％同一性的序列； 或与其具有1、 2、 3、 4或5个氨基酸残基差异的序 列。 22.根据权利要求19所述的多 核苷酸， 其中所述胞内域包 含CD3ζ 的信号传导 域。 23.根据权利要求22所述的多核苷酸， 其 中所述CD3ζ 的信号传导域包含SEQ  ID NO:135 的序列或与其具有至少90％同一 性的序列。 24.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述CAR具有以下结构： S ‑AB‑H‑TM‑IC， 其中S 是信号肽， AB是抗原结合 域， H是铰链区， TM是跨膜域并且IC是 胞内信号传导 域。 25.根据权利要求24所述的多核苷酸， 其中所述CAR具有以下结构： S ‑VH‑L‑VL‑H‑TM‑ IC， 其中VH是重链可变区， L是 连接子， VL是轻链可变区。 26.根据权利要求24所述的多核苷酸， 其中所述CAR具有以下结构： S ‑VL‑L‑VH‑H‑TM‑ IC， 其中VH是重链可变区， L是 连接子， VL是轻链可变区。 27.根据权利要求24所述的多核苷酸， 其 中所述CAR具有以下结构： S ‑SDAB‑H‑TM‑IC， 其 中SDAB是单域抗体。 28.根据权利要求24所述的多核苷酸， 其 中所述CAR具有以下结构： S ‑N‑H‑TM‑IC， 其中N 是纳米抗体。 29.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述胞外域还包含与癌症抗原特异性结合的 第二抗原结合 域。 30.根据权利要求29所述的多核苷酸， 其中所述癌症抗原选自由以下组成的组： CD19、 CD20、 CAIX、 CD33、 CD44v7/8、 CEA、 EGP ‑2、 EGP‑40、 erb‑B2、 erb‑B3、 erb‑B4、 FBP、 胎儿乙酰胆 碱受体、 GD2、 GD3、 Her2/neu、 IL ‑13R‑a2、 KDR、 k轻链、 LeY、 LI细胞粘附分子、 MAGE ‑Al、 间皮 素、 MUCl、 KG2D配 体、 癌胚抗原(h 5T4)、 PSCA、 PSMA、 TAA、 TAG‑72和VEGF ‑R。 31.根据权利要求1所述的多核苷酸， 其中所述胞外域还包含与白蛋白特异性结合的第 二抗原结合 域， 其中所述第一 抗原结合 域和第二 抗原结合 域结合白蛋白的不同表位。 32.根据权利要求31所述的多核苷酸， 其中所述胞外域还包含与癌症抗原特异性结合 的第三抗原结合 域。 33.根据权利要求1至 32中任一项所述的多 核苷酸， 其 为DNA或RNA。 34.一种多肽， 其由根据权利要求1至 33中任一项所述的多 核苷酸编码。 35.一种载体， 其包含根据权利要求1至33中任一项所述的多核苷酸， 其中编码所述CAR 的所述多 核苷酸可操作地连接 于至少一个调节性多 核苷酸元件以用于表达所述CAR。 36.根据权利要求35所述的载体， 其中所述载体是质粒载体、 病毒载体、 转座子、 定点插 入载体或自杀式表达载体。 37.根据权利要求36所述的载体， 其中所述病 毒载体是慢病 毒载体、 逆转录病 毒载体或 AAV载体。 38.一种工程细胞， 其包 含根据权利要求34所述的多肽。权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 115181751 A 3